（一）直接提取法在生物体或生物转化反应体系中，有些脂类药物是以游离形式存在的，如卵磷脂、脑磷脂、花生四烯酸及前列腺素等。提取不稳定的脂类时，应尽量避免加热。（三）生物转化法生物转化法包括微生物发酵、动植物细胞培养和酶工程技术。例如：微生物发酵法或烟草细胞培养法生产辅酶Q10；紫草细胞培养用于生产紫草素；以花生四烯酸为原料，用类脂氧化酶-2为前列腺素合成酶的酶原，通过酶工程技术将原料转化合成前列腺素。......
2023-06-24
辅酶Q10药物的生产技术优化
【摘要】：微生物发酵法是近年兴起的新的辅酶Q10生产方法。辅酶Q存在于大多数好气性生物中，特别是这些生物的线粒体中。不同生物来源的辅酶Q的侧链n值不同，为5～10，在人类及高等动物中仅有辅酶Q10，主要集中在肝、心、肾、肾上腺、脾、横纹肌等。药品辅酶Q10主要由生物材料提取获得。辅酶Q10为黄色或淡橙黄色、无臭、无味结晶性粉末。
一、生产前准备
（一）查找资料，了解辅酶Q10生产的基本知识
自然界存在的辅酶Q（CoQ）也称泛醌，是一些脂溶性苯醌的总称，其结构如图1-7-5所示。
图1-7-5 辅酶Q的化学结构式
根据侧链n值的不同，辅酶Q分为CoQ1、CoQ5、CoQ6、CoQ7、CoQ8、CoQ9、CoQ10等。辅酶Q存在于大多数好气性生物（从细菌到动物）中，特别是这些生物的线粒体中。不同生物来源的辅酶Q的侧链n值不同，为5～10，在人类及高等动物中仅有辅酶Q10，主要集中在肝、心、肾、肾上腺、脾、横纹肌等。药品辅酶Q10主要由生物材料提取获得。
辅酶Q10为黄色或淡橙黄色、无臭、无味结晶性粉末。易溶于氯仿、苯、四氯化碳，溶于丙酮、乙醚、石油醚，微溶于乙醇，不溶于水和甲醇。遇光易分解成微红色物质，对温度和湿度较稳定，熔点为49℃。易被化学还原剂及相应的酶还原为对应的醌醇。其氧化还原反应伴随明显的光谱变化。在乙醇中辅酶Q10在275 nm波长处有一强吸收带，若在乙烷中则移至272 nm波长处，转成醌醇后则变成在290 nm波长处有一弱吸收带，这为测定辅酶Q10提供了一种灵敏而专一的方法。
微生物发酵法是近年兴起的新的辅酶Q10生产方法。由于微生物细胞易于大规模培养生长，产品完全为天然的全反式构型，生物利用率高。产品中几乎无毒害化学物质残留，易于分离纯化，临床疗效较好，微生物发酵法是最有开发前景的生产方法。
（二）确定生产技术、生产原料和工艺路线
（1）确定生产技术：微生物发酵生产技术。
（2）生产原料：类球红细菌JDW-610突变株。
（3）确定生产工艺路线，如图1-7-6所示。
图1-7-6 辅酶Q10生产工艺流程
二、生产工艺过程
（1）菌种传代：采用斜面传代（培养基为肉汤培养基），于30℃避光培养4 d，长出草绿色圆形菌落，直径为1.4～2.0 mm。
（2）母瓶培养：挑出长势良好的草绿色圆形单菌落，接种于已灭菌的母瓶培养基上，在30℃、300 r/min条件下摇床培养25 h。（培养基配方：葡萄糖10 g，酵母粉6 g，蛋白胨5 g，氯化钠5 g，硫酸铵0.75 g，硫酸镁1 g，磷酸二氢钾0.3 g，硫酸亚铁0.2 g，硫酸锰0.05 g，硝酸铜0.03 g，硫酸锌0.007 g，水1000 mL。pH7.2，灭菌温度121℃，灭菌时间25 min。）
（3）一级种子罐培养：将母瓶培养液接入已灭菌的一级种子罐。控制搅拌转速为200～500 r/min，通气量为0.5～2 L/（L·min），罐温为28～32℃，罐压为0.02～0.05 MPa，培养时间为20～50 h。
（4）二级种子罐培养：当一级种子液菌体形态均匀，菌量丰富，且无菌度合格后，全部移入已灭菌的二级种子罐培养。控制搅拌转速为100～400 r/min，通气流量为0.3～1 L/（L·min），罐温为28～32℃，罐压为0.02～0.05 MPa，培养时间为10～30 h。（一级、二级种子罐培养基配方：葡萄糖3～10 g，酵母粉1～5 g，硫酸铵2～6 g，味精0.5～2 g，玉米浆粉0.3～2 g，硫酸镁1～4 g，磷酸二氢钾0.3～2 g，氯化钠1～4 g，硫酸亚铁0.2～1 g，硫酸锰0.03～0.1 g，硫酸锌0.001～0.01 g，轻质碳酸钙5～10 g，水1000 mL。pH6.5～7.0。）
（5）发酵罐培养：发酵罐接种，控制搅拌转速为90～130 r/min，通气量为0.3～1 L/（L·min），罐温为30～35℃，罐压为0.03～0.06 MPa，培养时间为70～100 h。（发酵基础料的配方：葡萄糖10～20 g，硫酸铵3～10 g，味精2～8 g，玉米浆粉4～9 g，硫酸镁5～10 g，磷酸二氢钾0.1～0.5 g，氯化钠1～5 g，硫酸亚铁1～3 g，硫酸锰0.1～0.4 g，氯化钴0.005～0.01 g，水1000 mL。pH 6.5～7.0。）发酵罐培养至菌体染色变浅，部分菌丝自溶，效价增长缓慢时放罐。
三、质量检验
（1）避光条件下，精密吸取5 mL发酵培养液，置于50 mL容量瓶中，分别加入6 mol/L盐酸1滴、丙酮10 mL、30%过氧化氢溶液0.5 mL，轻微振荡。再加入30 mL无水乙醇，将容量瓶置于超声器中超声处理30 s，取出，用无水乙醇定容至刻度。再将容量瓶置于超声器中超声提取45 min（水温控制在30～35℃），取出，摇匀。用0.45μm一次性有机过滤头过滤，弃去初滤液，收集续滤液。
（2）精密吸取供试品溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于275 nm波长处测定辅酶Q10的吸光度，计算其含量。
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2023-06-24
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2023-06-30
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