工作寿命是重载型扶梯的重要技术指标。因此要求桁架必须有更高的工作寿命。在大修周期内，主驱动机、主驱动轴、导轨、电缆等主要部件应能正常工作。如前所述，重载型自动扶梯主要部件的工作寿命一般按140000h进行设计，相当于20年的工作寿命。在机件的寿命计算中，可以每3h中1h以100%制动载荷运行，其余2h的平均载荷为60%的制动载荷计算等效载荷，约为80%的制动载荷。......
2023-06-15
如何提高超氧化物歧化酶的生产能力？
【摘要】：SOD可清除生物体内超氧阴离子自由基，对抗与阻断氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，因此引起了国内外生物化学界和医药界的极大关注。
一、生产前准备
（一）查找资料，了解超氧化物歧化酶生产的基本知识
超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一种重要的氧自由基清除剂，在自然界中分布极广。SOD可清除生物体内超氧阴离子自由基，对抗与阻断氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，因此引起了国内外生物化学界和医药界的极大关注。国际上将从牛红细胞中制备的SOD商品名定为“Orgotein”，经药理研究，证明它无毒、无抗原性，能抗炎、清除超氧阴离子、抗病毒感染，因而受到广泛重视，成为大有应用前景的药用酶。
1.SOD的氨基酸组成及结构
SOD是一类含有金属元素的活性蛋白酶，根据其所结合的金属离子，区分为Fe-SOD，Mn-SOD和Cu，Zn-SOD三种。Fe-SOD主要存在于原核细胞中；Mn-SOD存在于原核细胞体、真核细胞的细胞质内；Cu，Zn-SOD主要存在于真核细胞的细胞质内。另外，在牛肝中还发现一种Co，Zn-SOD。Fe-SOD和Mn-SOD在氨基酸组成、结构、性质等方面都很相似，而Cu，Zn-SOD则与它们差异较大。Fe-SOD和Mn-SOD都含有Tyr和Trp，而Cu，Zn-SOD则缺乏Tyr和Trp。SOD的活性中心有比较特殊的构象，金属辅基Cu和Zn与必需基团His的咪唑基等形成配位键。
2.SOD的理化性质
SOD的性质不仅取决于蛋白质部分，还取决于活性中心金属离子。由于SOD是一种金属蛋白，因此对热、对pH及在其他性质上表现出异常的稳定性。其主要理化性质见表1-5-2。
表1-5-2 SOD的化学组成和部分理化性质
（1）热稳定性 SOD对热稳定，牛红细胞的Cu，Zn-SOD的tm为83℃，是迄今为止发现热稳定性最高的球蛋白之一。天然牛血SOD在75℃下加热数分钟，酶活力丧失很少。酶的热稳定性与离子强度有关，如果离子强度非常低，即使加热到95℃数分钟，酶活力丧失也很少。金属辅助因子对SOD的耐热性有明显增强作用。
（2）pH的影响 SOD的活性与pH关系较大，天然Cu，Zn-SOD在pH3.6时，95%的Zn会脱落，在pH小于6.0时，Cu的结合位点要移动。当pH大于12.2时，SOD的构象会发生不可逆转变而导致酶失活。通常在pH5.3～9.5范围内，其催化反应速度不受影响。
（3）吸收光谱 Cu，Zn-SOD的吸收光谱取决于酶蛋白和金属辅基，不同来源的Cu，Zn-SOD的紫外吸收光谱略有不同。例如，人血SOD最大吸收波长在265 nm，而牛血SOD则在258 nm。几乎所有的Cu，Zn-SOD的紫外吸收光谱的共同特点是在280 nm波长处的吸收不存在或不明显，这是由于它不含色氨酸和酪氨酸，而在250～270 nm波长处均有不同程度的吸收。Cu，Zn-SOD的可见光吸收光谱反映二价铜离子的光学性质，不同来源的SOD都在680 nm波长附近呈现最大吸收。
（4）金属辅基与酶活性 SOD分子中含有金属离子，用电子顺磁共振测得1 mol酶中含1.93 mol的Cu和1.80 mol的Zn（牛血SOD）。Cu是酶活性中心的必需组分，与催化活性直接相关。如透析去除Cu，则酶活力全部丧失，重新加入Cu则酶活力又可恢复。Zn则起稳定酶分子结构的作用。在Mn-SOD和Fe-SOD中，Mn和Fe与Cu一样，对酶活力也是必不可少的。
（5）变性剂和还原剂的影响 在含有SDS、EDTA的6 mol/L脲溶液中加热，牛红细胞Cu，Zn-SOD的活性丧失很快，但单独用5 mol/L 脲溶液处理则酶活力不变。如在酶所在的缓冲液中加入一定量的EDTA，则酶活力也要丧失。这是由于EDTA螯合了酶活性中心的必需组分Cu而使酶失活。还原剂主要作用于酶的巯基或二硫键，当加入巯基乙醇后SOD会解聚，导致酶活力的下降。
3.药理作用与临床应用
（1）对自身免疫性疾病的治疗作用 类风湿性关节炎、红斑狼疮、皮肌炎等是胶原性的自身免疫性疾病（胶原病），用SOD处理，均可获得缓解或治愈。回肠结肠炎是一种极为顽固的肠道自身免疫性疾病，也可用SOD皮下注射进行治疗。
（2）治疗其他炎症及水肿 用SOD静脉注射治疗肺炎有特效。SOD对各类过敏性所致水肿（如抗血清引起的皮肤水肿、角叉菜聚糖引起的脚部水肿以及其他炎症性水肿）都有疗效，对各类细菌引起的发炎也有较好的疗效。
（3）抑制心脑血管疾病 SOD可清除人体内多余的氧自由基，降低脂质过氧化物的含量，具有调节血脂的保健作用，可预防动脉粥样硬化，预防高血脂引起的心脑血管疾病。SOD也用于抗辐射、抗肿瘤，治疗氧中毒、心肌缺氧与缺血再灌注综合征以及某些心血管疾病。
（4）治疗辐射病及辐射防护 SOD可治疗因放疗引起的膀胱炎、皮肌炎及白细胞减少等疾病，对有可能受到电离辐射的人员，也可注射SOD作为预防措施。
（5）其他 SOD可清除自由基，延缓衰老；抗疲劳，增强肝肾功能；对白内障也有较好的预防作用；对糖尿病有明显的恢复作用。
（二）确定生产技术、生产原料和工艺路线
（2）确定生产原料：新鲜牛血。
（3）确定生产工艺路线：如图1-5-2所示。
图1-5-2 以新鲜牛血为原料提取SOD的工艺流程
二、工艺过程
（一）分离、收集血红细胞
取新鲜牛血，按100 kg牛血加3.8 g柠檬酸钠的比例投料，搅拌均匀，以3000 r/min冷冻离心15 min，收集血红细胞。
（二）浮选、溶血、去血红蛋白
将收集的血红细胞用0.9%氯化钠溶液洗三次。在干净的血红细胞中加入等体积的去离子水，在0～4℃下，搅拌溶血30 min，再缓慢加入溶血液0.25倍体积的4℃以下的95%乙醇和0.15倍体积（相对于溶血液体积而言）的4℃以下的氯仿，搅拌15 min，使之均匀，静置15 min，冷冻离心30 min，去除血红蛋白，收集上清液。
（三）分级沉淀、热变性
向上清液中加入1.5倍体积的冷丙酮，搅拌均匀，产生大量的絮状沉淀，于冷处静置20 min，离心得沉淀物。沉淀物用1～2倍体积的去离子水溶解，在60～70℃水浴中保温10 min，冷却，冷冻离心，收集浅绿色的上清液，再用1.5倍冷丙酮使上清液沉淀，5℃以下静置过夜，冷冻离心，收集沉淀，得SOD粗品。
（四）透析、柱层析
将SOD粗品溶于pH7.8、2.5 mmol/L磷酸钾缓冲液中，以相同缓冲液平衡透析。将透析液小心加到已用pH7.8、2.5 mmol/L磷酸钾缓冲液平衡好的DEAE-纤维素（DEAE-32）柱或DEAE-Sephadex A-50上吸附，加样后，先用2.5 mmol/L、pH7.8磷酸钾缓冲液洗脱杂蛋白，然后用2.5～50 mmol/L、pH7.8的磷酸钾缓冲液进行梯度洗脱，收集具有SOD活性的洗脱液。
（五）超滤、冷冻干燥
将上述洗脱液超滤浓缩，无菌过滤，冷冻干燥，即得Cu，Zn-SOD成品（冻干粉）。
（六）质量检测
1.质量检查
主要是对SOD进行纯度检查，鉴定SOD纯度主要根据以下三个指标。
（1）均一性，常用电泳鉴定，观察其是否达到电泳纯，通常用聚丙烯酰胺凝胶电泳；也可用琼脂糖凝胶平板电泳，此法操作较简便，试剂单一且色带的间隔远比前者大，更易观察与分析；还可进行超离心分析，观察其均一性。
（2）酶的比活力要求达到一定标准，如牛红细胞的Cu，Zn-SOD，其比活力（黄嘌呤氧化酶-细胞色素c法）应不低于3000 U/mg（蛋白质）。
（3）酶的某些理化性质应符合要求，如金属离子含量、氨基酸含量和吸收光谱等。
2.酶活力测定
SOD活力测定法很多，主要有化学法、免疫法和等电聚焦法三种。其中以化学法测定最为普遍。
（1）黄嘌呤氧化酶-细胞色素c法（简称550 nm法）。
①测定系统：取pH7.8、300 mmol/L磷酸缓冲液0.5 mL（其中含0.6 mmol/L的EDTA）、6×10-6mol/L氧化型细胞色素c溶液0.5 mL、0.3 mmol/L黄嘌呤溶液0.5 mL、双蒸水1.3 mL，在25℃下保温10 min，最后加入1.7×10-3 U/mg（蛋白质）的黄嘌呤氧化酶溶液0.2 mL，并立即开始计时，速率变化在2 min内有效，要求还原速率（在550 nm波长处，每分钟内吸光度A的变化值）控制在0.025/min。测定酶活力时，加入0.3 mL被测SOD溶液，双蒸水相应减至1 mL，并控制SOD浓度，使氧化型细胞色素c还原速率降为0.0125/min。
②酶活力计算公式：
式中，V总∶V定义体积=3∶3。
③酶活力定义：在上述条件下，3 mL的反应液中，每分钟抑制氧化型细胞色素c在550 nm波长处还原速率达50%（550 nm，0.0125/min）的酶量定为一个活力单位。
（2）微量邻苯三酚自氧化法（简称325 nm法）。
①测定系统：取pH8.2、50 mmol/L Tris-HCl缓冲液2.99 mL（其中含1 mmol/L EDTA），在25℃预保温10 min，最后加入50 mmol/L邻苯三酚溶液（配制于10 mmol/L盐酸中）10μL，使反应体积为3 mL，立即计时，自氧化速率变化在4 min内有效，控制邻苯三酚自氧化速率为0.070/min，测SOD活力时，加入约0.4 mL的SOD溶液，缓冲液相应减至2.55 mL，并控制SOD浓度，使邻苯三酚自氧化速率降为0.035/min左右。
②酶活力计算公式：
式中，V总∶V定义体积=3∶1。
③酶活力定义：在上述条件下，1 mL反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50%时的酶量（325 nm，0.035/min）定为一个活力单位。若自氧化速率在35%～65%，通常可按比例计算，不在此范围内的数值应相应增减酶量。
有关生物制药工艺（第2版）的文章
- 详细阅读
-
如何提高和保证加工精度？详细阅读
为了提高和保证加工精度，可以通过采取一定的工艺措施和其他方法来减少或消除这些误差对加工精度的影响。图3-18 刀具转位误差的转移5.就地加工法有些零件或产品的精度在加工和装配中难以达到或者根本不可能，如果采用就地加工法，就有可能很快地解决看似非常困难的精度问题。......
2023-06-25
-
如何提高水库职工的素质与技能？详细阅读
管理好陡河水库，充分发挥工程效益，对水库职工的文化素质、经营管理素质等要求越来越高，因此，职工对“科技是第一生产力”、“知识就是力量”的观念不断增强。根据陡河水库管理、经营等项事业发展及技术更新、技术改造的需要，组织职工参加对口培训。为提高水库管理处工人队伍的劳动技能水平，积极组织个人参加唐山市工人技术等级培训、考核。......
2023-06-18
-
如何提高梁弯曲强度？详细阅读
影响梁的弯曲强度的主要因素是弯曲正应力，而弯曲正应力的强度条件为所以要提高梁的弯曲强度，应从如何降低梁内最大弯矩Mmax的数值及提高抗弯截面系数Wz 的数值着手。为提高梁的弯曲强度，可采取以下措施。图7-29均布载荷集中载荷作用的简支梁合理配置载荷。大的截面形状梁的合理截面应该是用较小的截面面积获得较大的抗弯截面系数，从梁横截面正应力的分布情况来看，应该尽可能将材料放在离中性轴较远的地方。......
2023-06-19
-
如何提高推广经理的沟通技巧详细阅读
第四章推广沟通技能本章导读：●推广经理如何向上沟通●推广经理如何对下沟通●推广经理如何与平级沟通●推广经理如何与客户沟通推广经理每天经手的事务，大部分都是围绕信息沟通这一重点展开的——与上级、下属、同事、客户的交流无时不在。推广经理对上级可以越级申诉，但不能越级报告。有效沟通张克，某集团分公司生产管理部门的经理。于是张克决定与总经理进行必要的责权沟通，以此来改变这种局面。......
2023-12-06
-
如何提高曲轴冷却速度？详细阅读
相同的化学成分，由于冷却速度不同可获得不同的组织，从而具有不同的性能。适当加快铸件的冷却速度，不但可使铸件截面上的温度梯度增大，促进方向性凝固，增强补缩作用，而且有利于加强石墨化膨胀的自身补缩能力，减少内部缩孔、缩松缺陷。在曲轴生产中，可采取以下措施提高冷却速度。......
2023-07-02
-
如何提高齿轮坯精度？详细阅读
齿轮坯的基准表面的精度对齿轮的加工精度和安装精度的影响很大。用控制齿轮坯精度来保证和提高齿轮的加工精度是一项有效的技术措施。有关齿轮坯精度参数的数值，只有明确其特定的轴线时才有意义。表7-5齿轮坯尺寸公差表7-6齿轮坯径向和轴向圆跳动公差齿轮的加工、检验和装配，应尽量采取基准一致的原则。表7-8齿面表面粗糙度允许值注：齿轮的三项精度等级不同时，按最高的精度等级确定。......
2023-06-15
-
如何提高服装的保暖性能？详细阅读
静止空气的导热系数小于普通常用纤维，热传导性能差，可见纺织服装内部若适当地增加静止空气层或适当地降低纤维制品的体积重量，也能降低其导热系数，改善纤维制品的保暖性。与导热系数相比，热阻的测量可以避免织物厚度测量带来的影响，而且织物热阻的测量使得织物的热阻值可参与热环境的热损耗等计算，因为织物各层的热阻可相加。但是这种热阻的表达方式不便于记忆，也不便于描述服装的隔热性能。......
2023-06-21
相关推荐