目前构成天然蛋白质的20种氨基酸的生产技术主要有天然蛋白质水解技术、微生物发酵生产技术、酶法合成技术、化学合成法。（一）天然蛋白质水解技术以毛发、血粉及废蚕丝等蛋白质为原料，通过酸、碱或酶水解成多种氨基酸混合物，经分离纯化获得各种药用氨基酸的技术称为天然蛋白质水解技术。发酵所用菌种主要是细菌、酵母菌，现代生物工程采用细胞融合技术及基因重组技术改造微生物细胞，已获得多种高产氨基酸杂种菌株及......
2023-06-24
氨基酸药物的检测技术优化方案
【摘要】：在到达滴定终点时，因氨基酸的离子强度急剧变化而引起指示电极的电位骤减或突增，此转折点称为突跃点。采用电化学分析法时，可选择适用于不同氨基酸的选择电极，对各种氨基酸进行测定。根据1 mL高氯酸滴定液相当于氨基酸或其盐的值，计算出被测定的氨基酸或其盐的量。荧光检测法通过使氨基酸与衍生试剂发生化学反应，生成的氨基酸衍生物能够用荧光分光光度计分析，根据标准曲线可得知被测氨基酸的含量。
（一）化学分析法
（1）甲醛滴定法 在中性或弱碱性水溶液中，氨基酸的α-氨基与醛类反应，生成—NHCH2OH、—N（CH2OH）2羟甲基衍生物，使氨基酸由两性化合物转变成酸性化合物，然后用常规的碱滴定法测定氨基氮，如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。此法简便、快速。
（2）凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定氨基酸或蛋白质样品中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品，将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并被过量的酸液吸收，再以标准碱液滴定，就可计算出样品中的氮量。然后根据氨基酸和蛋白质中的氮含量计算出含氮的氨基酸、蛋白质的总量。该方法准确度高，但试剂消耗量大，操作步骤较复杂，测定周期长。
（二）电化学分析法
选用两支不同的电极：一支为指示电极，其电极电位随着溶液中被分析的氨基酸的浓度的变化而变化；另一支为参比电极，其电极电位固定不变。在到达滴定终点时，因氨基酸的离子强度急剧变化而引起指示电极的电位骤减或突增，此转折点称为突跃点。采用电化学分析法时，可选择适用于不同氨基酸的选择电极，对各种氨基酸进行测定。但一般采用《中国药典》的方法，即：取待测品若干（mg），精密称定，加无水甲酸3 mL使之溶解，加冰乙酸50 mL与乙酸汞试液10 mL，采用电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。根据1 mL高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于氨基酸或其盐的值，计算出被测定的氨基酸或其盐的量。
电化学分析法的最大优点在于不需衍生反应，操作简便，它与各种现代化的分离方法相结合，可以大大简化操作过程，节省分析时间。
（三）分光光度法
组成蛋白质的20种氨基酸中，大多数氨基酸分子对紫外和可见光的吸收很弱或无吸收，所以通常利用氨基酸分子中的氨基、羧基或其他活性基团与衍生试剂反应，生成具有可见光、紫外生色团或能产生荧光的衍生反应产物，然后用可见光、紫外或荧光检测器进行检测。
（1）可见光检测法 通过使氨基酸与衍生试剂发生化学反应，生成的氨基酸衍生物在可见光光谱范围内有吸收，通过测定吸光度值，根据标准曲线可得知被测氨基酸的含量。通常能使氨基酸生成在可见光区有吸收的衍生试剂有茚三酮、磺酰氯二甲胺偶氮苯（DABSYL-Cl）。
（2）紫外光检测法 通过使氨基酸与衍生试剂发生化学反应，生成的氨基酸衍生物在紫外光光谱范围内有吸收，通过测定吸光度值，根据标准曲线可得知被测氨基酸的含量。通常能使氨基酸生成在紫外光区有吸收的衍生试剂有邻苯二甲醛（OPA）、异硫氰酸苯酯（PITC）、6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺氨基甲酸酯等。
（3）荧光检测法 通过使氨基酸与衍生试剂发生化学反应，生成的氨基酸衍生物能够用荧光分光光度计分析，根据标准曲线可得知被测氨基酸的含量。通常能使氨基酸生成产生荧光的衍生试剂有邻苯二甲醛、丹酰氯（DANSYL-Cl）、氯甲酸-9-芴基甲酯（FMOC-Cl）。
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2023-06-24
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