rhEPO体内活性测定结果

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验九重组人促红细胞生成素的体内活性测定促红细胞生成素是一种强有力的造血生长因子，专一性地刺激红祖细胞系细胞的增殖，形成成熟的红细胞集落。人体中的EPO是由肾脏和肝脏分泌的一种激素样物质，能够促进红细胞生成。因此，可根据已知不同剂量的EPO与外周血网织红细胞数量的关系曲线来定量测定样品EPO的体内生物学活性。

实验九　重组人促红细胞生成素（rhEPO）的体内活性测定

促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是一种强有力的造血生长因子，专一性地刺激红祖细胞系细胞的增殖，形成成熟的红细胞集落。人体中的EPO是由肾脏和肝脏分泌的一种激素样物质，能够促进红细胞生成。服用红细胞生成素可以使患肾病贫血的病人增加血流比溶度（即增加血液中红细胞百分比）。

重组人促红细胞生成素（RecombinantHumanErythropoietin，rhEPO）是通过基因工程方法克隆人的EPO基因，在中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中高效表达，经细胞培养、分离和高度纯化后制成的液体制剂或冻干制剂，它与人体内分离、纯化的天然红细胞生成素具有相同的结构和生物学特性。1991年美国FDA已正式批准上市，成为在临床上治疗慢性肾衰竭引起的贫血和肿瘤化疗后贫血的最畅销药。

1.实验目的

掌握促红细胞生成素的体内活性测定方法及药理作用。

2.实验原理

给小鼠注射EPO，造成体内高EPO状态，EPO促进骨髓内干细胞加速分化为原始红细胞，促进有核红细胞的有丝分裂，促其加速成熟，促进血红蛋白的合成，以及促进骨髓内网织红细胞和成熟红细胞的释放，小鼠外周血中不仅红细胞增多，而且还出现大量的网织红细胞，甚至有核红细胞。

网织红细胞没有细胞核，基质中含有未成熟红细胞基质的核糖体、线粒体及其他成分，这些物质形态不一，可为网状、细小点状或线状，可被煌焦油蓝染成蓝色或浅蓝色，由此可与其他细胞相区别。

因此，可根据已知不同剂量的EPO与外周血网织红细胞数量的关系曲线来定量测定样品EPO的体内生物学活性。

3.实验试剂及材料

（1）稀释液：含0.1%牛血清白蛋白（BSA）的生理盐水溶液。

（2）EPO标准品：用稀释液稀释成20U/ml、40U/ml、80U/ml。

（3）EPO样品：用稀释液稀释为2个不同浓度。

（4）磷酸盐缓冲液（PBS，pH6.8）：KH₂PO₄0.3g，Na₂HPO₄·12H₂O0.2g，加蒸馏水至1000ml，调pH值至6.8。

（5）瑞氏染液：瑞氏染料1g，加无水甲醇600ml，充分研磨使染料完全溶解，过滤，储存于棕色试剂瓶中，室温下放置1个月后备用。