蛋白质药物相对分子量及纯度测定

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验十一蛋白质药物的相对分子量及纯度测定1.实验目的学习并掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量及蛋白质纯度的方法。该法主要依据蛋白质的分子量不同而对其进行分离。离子去污剂SDS与蛋白质的疏水部分相结合，可破坏蛋白质的折叠结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。SDS-蛋白质复合物的长度与蛋白质的分子量成正比。因此可以利用SDS-PAGE分析蛋白质的分子量及蛋白质混合物的纯度。

实验十一　蛋白质药物的相对分子量及纯度测定

1.实验目的

学习并掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定蛋白质分子量及蛋白质纯度的方法。

2.实验原理

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）因易于操作和广泛的用途，使其成为许多研究领域中一种重要的分析技术。SDS-PAGE是对蛋白质进行量化、比较及特性鉴定的一种经济、快速，而且可重复的方法。该法主要依据蛋白质的分子量不同而对其进行分离。离子去污剂SDS与蛋白质的疏水部分相结合，可破坏蛋白质的折叠结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。SDS-蛋白质复合物的长度与蛋白质的分子量成正比。在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂SDS和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。因此可以利用SDS-PAGE分析蛋白质的分子量及蛋白质混合物的纯度。

3.实验试剂与器材

丙烯酰胺，N’,N’-甲叉双丙烯酰胺，SDS，TEMED，10%过硫酸铵，α-巯基乙醇，甘油，溴酚蓝，甘氨酸，盐酸，DTT，考马斯亮蓝R-250，甲醇，冰乙酸，垂直凝胶电泳装置，微量加样枪，电泳仪，沸水浴，eppendorf管，摇床。

4.操作步骤

（1）组装凝胶模具：将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净，ddH₂O冲洗数次，再用乙醇擦拭后晾干；然后将两块洗净的玻璃板之间加入Spacer，装好玻璃板。