首页百科知识血清免疫球蛋白粗品制备法

血清免疫球蛋白粗品制备法

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验八血清免疫球蛋白粗品的制备1.实验目的掌握制备血清IgG的基本操作方法。IgG也是人和动物血浆蛋白的重要组分之一。血浆中的蛋白质有70多种，通过控制硫酸铵的浓度，能使血浆中的各个成分分步析出，使IgG得到初步纯化。⑤3000r/min离心30分钟，弃上清液，沉淀即为IgG粗制品。IgG粗制品含量的测定①取上述IgG粗制品，加5ml生理盐水溶解。6．结果分析计算IgG的含量。

实验八　血清免疫球蛋白粗品的制备

1.实验目的

掌握制备血清IgG的基本操作方法。

2.实验原理

IgG是免疫球蛋白（immunoglobulin,简称Ig）的主要成分之一，相对分子质量约为150000~ 160000。IgG也是人和动物血浆蛋白的重要组分之一。血浆中的蛋白质有70多种，通过控制硫酸铵的浓度，能使血浆中的各个成分分步析出，使IgG得到初步纯化。

3.实验试剂与材料

（1）血清。

（2）生理盐水。

（3）IgG标准品。

（4）饱和硫酸铵溶液：取（NH₄)₂SO₄800g，加蒸馏水1000ml，不断搅拌下加热至50℃~60℃，保持30分钟，趁热过滤，滤液在室温中过夜，有结晶析出，即达到100%饱和度，最后用浓氨水调至pH至7.0。

（5）烧杯、量筒、玻璃棒、电炉。

4.实验仪器

高速离心机、紫外分光光度计、酸度计。

5.操作步骤

（1）盐析(www.chuimin.cn)

①取10ml血清，加入10ml生理盐水，配制成20ml稀释液（以减少共沉淀）。

②在稀释液中逐滴加入饱和硫酸铵溶液20ml，边加边搅拌，使硫酸铵饱和度为50%，室温放置1小时。

③3000r/min离心30分钟，弃去上清液。

④用20ml生理盐水溶解沉淀，然后逐滴加入中性饱和硫酸铵溶液10ml，边加边搅拌，使硫酸铵饱和度为33%，室温放置1小时。

⑤3000r/min离心30分钟，弃上清液，沉淀即为IgG粗制品。

（2）IgG粗制品含量的测定

①取上述IgG粗制品，加5ml生理盐水溶解。②紫外分光光度计上测A280。

③按公式：c=A/E，计算IgG含量。

式中，c为IgG的浓度；A为测得的A280；E为浓度为1%的IgG在280nm处测得的光吸收值，值为13。

6．结果分析

计算IgG的含量。

7．思考题

（1）影响IgG得率的因素有哪些？