HeLa细胞与鸡红细胞融合实验的结果

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验六HeLa细胞与鸡红细胞的融合实验1.实验目的初步掌握动物细胞PEG融合的方法。用灭活的病毒或PEG处理细胞，能使质膜性质发生改变，使细胞膜融汇，胞质流通，导致细胞融合。细胞融合的结果，产生2类多核细胞。将上述鸡红细胞悬液及HeLa细胞悬液混合，先取出0.2ml混合液，用Hanks液稀释5倍，作为对照。

实验六　HeLa细胞与鸡红细胞的融合实验

1.实验目的

初步掌握动物细胞PEG融合的方法。

2.实验原理

细胞融合（cellfusion）的方法主要有病毒法、聚乙二醇（PEG）法和电融合法。用灭活的病毒或PEG处理细胞，能使质膜性质发生改变，使细胞膜融汇，胞质流通，导致细胞融合。由于PEG易得、操作方法简单、效果稳定，而被广泛应用于多种植物和动物细胞的融合试验。细胞融合的结果，产生2类多核细胞。一类细胞中含有来自同一种亲本的核，称为同核体（homocaryons）；而另一类细胞中含有来自两个亲本的核，称为异核体（heterocaryons）。融合后的多核细胞大多只能存活十几天就相继死亡，只有双核的异核体才能存活下来。存活下来的异核体进行有丝分裂，则可产生杂种细胞（hybridcell）。在杂种细胞中，分离开的细胞核的核被膜破裂，2个核的染色体汇聚在一起，形成1个大核，经克隆培养，可从杂种细胞产生杂种细胞系。杂种细胞被广泛应用于研究核质关系、绘制染色体基因图谱、制备单克隆抗体、进行育种和肿瘤学研究等。

3.实验试剂及材料

50%PEG（Mr1000～6000），Hanks液，甲醇，Giemsa染液，碘酒，75%酒精，新鲜鸡红细胞，HeLa细胞，无菌注射器（1ml，5ml），6号针头，刻度离心管，试管，载玻片，盖玻片。

4.实验仪器

超净工作台，CO₂培养箱，离心机，37℃恒温水浴锅，光学显微镜，倒置显微镜等。

5.实验步骤

（1）50%PEG（体积分数）的制备：取PEG10g，放入青霉素瓶子中，加胶塞并插一个针头，10磅高压灭菌15分钟，冷却至约50℃时，加入10ml已预热至约50℃的Hanks液中，混匀。然后按每瓶1ml分装，置-20℃保存。使用前置于37℃水浴中助融。制备过程中如有凝固现象，可在酒精灯上略烤，使其熔化。

（2）在鸡翅下取新鲜静脉血，以0.85%生理盐水离心洗2次（1500r、5分钟），然后用Hanks液调节鸡红细胞浓度为1×10⁷/ml，取5ml备用。

（3）无菌条件下用胰蛋白酶消化处于对数生长期的HeLa细胞，1500r/分钟离心5分钟，弃上清，用Hanks液调节HeLa细胞浓度为1×10⁶/ml，取5ml备用。

（4）将上述鸡红细胞悬液及HeLa细胞悬液混合，先取出0.2ml混合液，用Hanks液稀释5倍，作为对照。再将余下混合液以1500r/分钟离心5分钟，小心弃去上清，留下0.1ml液体，用指弹法将细胞团块弹散。

（5）在上述0.1ml液体中逐滴加入在37℃下预热的50%PEG溶液0.5ml，在90秒内连续滴完，边滴加边轻摇混匀，待PEG全部加入后静置70秒。此全部过程都要求在37℃水浴内进行。(www.chuimin.cn)

（6）缓慢滴加9mlHanks液以终止PEG的作用，在37℃水浴中静置5分钟。

（7）1500r/分钟离心5分钟，弃上清后，余下0.1ml液体，用指弹法将细胞团块弹散，加入适量Hanks液，调节细胞浓度。

（8）取融合后的细胞悬液和对照细胞悬液各滴3张片，制成涂片，迅速干燥，将细胞涂片置于甲醇中固定10分钟，取出后晾干，Giemsa染色，水洗、干燥，待镜检。也可将融合后的细胞悬液和对照细胞悬液分别滴于载玻片上，加盖盖玻片后，在相差显微镜下直接进行观察。

（9）镜检：先用低倍镜找到好的视野，再换用高倍镜观察细胞的融合现象。

6.结果与分析

（1）先观察对照组，从形态上识别2种亲本细胞并观察其中有无融合细胞；再观察实验组，找出融合后的多核细胞、双核细胞，并区分同种融合与异种融合细胞。

（2）画出你所观察到的实验组和对照组中典型的各类细胞形态。

7.注意事项