生物技术制药实验：烟草叶片组织培养成果

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验五烟草叶片的组织培养1.实验目的掌握利用叶片作为外植体进行无性繁殖的方法，为利用烟草细胞培养物进行烟碱等次生物质的生产奠定基础。上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8。约2～3天后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15天后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织。

实验五　烟草叶片的组织培养

1.实验目的

掌握利用叶片作为外植体进行无性繁殖的方法，为利用烟草细胞培养物进行烟碱等次生物质的生产奠定基础。

2.实验试剂

MS培养基各种母液、2，4-D、KT、6-BA、NAA、IAA、蔗糖、琼脂、酒精、升汞。

3.实验器材

超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、三角瓶、培养皿、解剖刀。

4.实验步骤

（1）培养基的配制

①愈伤组织诱导培养基：MS+2,4-D（1.0mg/L）+NAA（2.0mg/L）+KT（0.5mg/L）。

②愈伤组织分化培养基：MS+KT（2.0mg/L)+IAA（0.5mg/L）。

③幼芽增殖培养基：MS+6-BA（1.0mg/L）+NAA（0.2mg/L）。

④生根培养基：MS+NAA（0.2mg/L）。(www.chuimin.cn)

上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8。

（2）接种及愈伤诱导

取烟草幼嫩叶片，自来水充分洗净后，经75%酒精消毒30秒、0.1%升汞溶液浸泡8分钟、无菌水冲洗5～6次后，去掉主叶脉和大的侧叶脉，将叶片切成1.0～1.5cm²的小方块，接入诱导培养基①中培养，培养温度25℃±2℃，光照14h/d，光照强度2000lx。接种时下表皮与培养基接触，每三角瓶接种3～5个外植体。约2～3天后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15天后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织。

（3）愈伤组织的分化

将愈伤组织转接到分化培养基②上，15天后，从疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。40天后，从愈伤组织上分化出越来越多幼芽。

（4）幼芽的增殖

将幼芽切下，转接至不加2,4-D的幼芽增殖培养基③上，可不断增殖、发育成绿色健壮的小苗。

（5）诱导生根及移栽

取约3～4cm长的无根小苗接种于生根培养基④中，约7～8天后，外植体从其基部产生白色幼根，当试管苗长至5～6cm高时，打开瓶口，在散射光下放置2天后取出，洗去根部残留培养基，种植于经过消毒的珍珠岩、泥炭土和菜园土等量混合的基质中，成活率可达95%以上。

5.思考题

（1）如何利用烟草细胞培养物进行烟碱等次生物质的生产（查阅相关文献）？

生物技术制药实验：烟草叶片组织培养成果

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