酵母蔗糖酶结晶实验结果

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验四十一酵母蔗糖酶的结晶1.实验目的掌握酵母蔗糖酶的结晶方法2.实验原理常用的蛋白质结晶方法有：微池法结晶，蒸汽扩散法，液—液扩散法和透析结晶法等。此步操作为丙酮一硫酸铵协同除杂。将得到的酵母蔗糖酶的晶体显微镜下观察形态并描述，用测微尺测量晶体尺寸并记录。

实验四十一酵母蔗糖酶的结晶

1.实验目的

掌握酵母蔗糖酶的结晶方法

2.实验原理

常用的蛋白质结晶方法有：微池法结晶，蒸汽扩散法，液—液扩散法和透析结晶法等。现有的结晶方法结晶量小，需要使用高度纯化的蛋白质，常使用离子交换或亲和层析等方法进行纯化。常用的结晶剂包括盐、有机溶剂、聚乙二醇4000等。与结构研究相比，用作交联酶晶体催化剂的酶晶体对晶体质量要求相对较低，但要求数量大。要从纯化程度较低的酶液中结晶酶，其结晶时间可能较短，结晶液可达数升至数百升，所用试剂相对较少，从而大幅度降低酶晶体的成本。硫酸铵．丙酮协同沉淀要优于单独硫酸铵分级沉淀，可能有以下几个优点：①硫酸铵和丙酮分级沉淀的机理不同，前者是中和蛋白质的表面电荷使其沉淀，而后者是降低溶液的介电常数而使其沉淀，两者在协同沉淀时可使两者的作用相互补，从而提高了效率。②当单独使用硫酸铵沉淀时，随着其饱和度的升高，溶液的密度也变大，不利于后期的离心分离，而加入一定体积丙酮后，溶液的密度减少，则有利于离心分离。③与单独硫酸铵、丙酮沉淀相比，它的第一次沉淀量大，除杂多，纯化效果好。