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2023-11-02
实验三十七酸奶中乳酸菌的测定
1.实验目的
(1)了解酸奶中乳酸菌分离原理。
(2)学习并掌握酸奶中乳酸菌数量的检测方法。
2.实验原理
活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例,有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。由于乳酸菌对营养有较为复杂的要求,在生长时需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等参与,一般的肉汤培养基难以满足其要求。测定乳酸菌时必须尽量将样品中所有活的乳酸菌检测出来。要提高检出率,关键是要选用特定良好的培养基。采用稀释平板菌落计数法,检测酸奶中的各种乳酸菌可获得较满意的结果。
3.实验材料与器材
(1)材料
培养基:MRS培养基,改良CHALMERS培养基,M17培养基
(2)器材
无菌移液管(25ml,1ml),无菌水(225ml带玻璃珠三角瓶,9ml试管),无菌培养皿,旋涡均匀器,恒温培养箱。
4.实验步骤
(1)样品稀释
先将酸奶样品搅拌均匀,用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中,在旋涡均匀器上充分振摇,务必使样品均匀分散,即为1/10的样品稀释液,然后根据对样品含菌量的估计,将样品稀释至适当的稀释度。(www.chuimin.cn)
(2)制平板
选用2~3个适合的稀释度,培养皿贴上相应的标签,分别吸取不同稀释度的稀释液1ml置于平皿内,每个稀释度重复作3个样品。然后将溶化冷却至46℃左右的MRS或改良CHALMERS培养基倒入平皿中,然后快速转动平皿使之混合均匀,冷却成平板。
(3)培养和计数
将平皿倒置于40℃恒温箱内培养24~48小时,观察长出的细小菌落,计算菌落数目,按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
5.实验结果
(1)指示剂显色反应乳酸菌的菌落很小,1~3mm,圆形隆起,表面光滑或稍粗糙,呈乳白色、灰白色或暗黄色。由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈,酸碱指示剂呈酸性显色反应。
(2)镜检形态
必要时,可挑取不同形态菌落制片镜检以确定是乳杆菌还是乳链球菌。保加利亚乳杆菌呈杆状,成单杆、或双杆菌或长丝状;而嗜热链球菌,呈球状,成对、或短链、或长链状。
(3)参照比较
据介绍,改良CHALMERS培养基的检出率较MRS培养基高,M17培养基较适合于乳球菌的培养,在检测时可同时使用多个培养基作比较。
6.思考题
(1)为什么乳酸菌的检测的关键是选用特定良好的培养基?
(2)培养基中为什么要加CaCO3?
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