生物技术制药实验：枯草芽孢杆菌发酵培养

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验三十三机械搅拌发酵罐发酵培养枯草芽孢杆菌1.实验目的学习细菌的扩大培养，掌握实验室摇瓶操作的基本步骤。检查发酵罐安装完好后，105℃灭菌15分钟。定期测定菌液浓度，当菌淮浓度达到最高时结束发酵。

实验三十三机械搅拌发酵罐发酵培养枯草芽孢杆菌

1.实验目的

（1）学习细菌的扩大培养，掌握实验室摇瓶操作的基本步骤。

（2）熟悉小型发酵罐的通风发酵过程。

（3）了解从生产菌种到发酵的全过程。

2.实验原理

从接种试管菌种开始，通过逐级放大增加培养物，最终使用机械搅拌罐发酵枯草芽孢杆菌。摇瓶培养是实验室常用的通风培养方法，通过装有液体培养物的三角瓶放在摇床上振荡培养，以满足微生物的生长、繁殖及产生许多代谢产物对氧的需求，它是实验室探索发酵工艺条件的常用方法。

3.实验材料

枯草芽孢杆菌，种子培养基，发酵培养基，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶，发酵罐。

4.实验方法

（1）工艺流程

试管斜面菌种（12小时，37℃）→接种（1环菌苔）→摇瓶种子培养液中，250ml三角瓶振荡培养（12小时，37℃）→种子培养液，接种（1%～5%）→机械搅拌发酵罐发酵。

（2）发酵罐种子液的制备

摇瓶种子培养基：葡萄糖20g，牛肉膏1g，蛋白胨5g，NaCl5g，H₂O1000ml，pH7.0。高压灭菌锅121℃灭菌20分钟。

摇瓶种子培养基分装于250ml三角瓶，每瓶50ml。从斜面上挑取一环菌种，接入摇瓶种子培养基，37℃，150rpm振荡培养12小时即为种子液。

（3）发酵培养基制备(www.chuimin.cn)

发酵培养基：蔗糖20g，淀粉20g，酵母膏1g，蛋白胨5g，NaNO₃3g，KH₂PO₄5g,CaCO₃ 10g，H₂O1000ml；pH7.0。

淀粉糊化：淀粉∶水＝1∶4加入预热至60℃水中，边加边搅拌，煮沸10分钟成糊状（煮沸过程中不断搅拌）。

（4）发酵（演示）

①空消：空罐灭菌。

②实消：将发酵培养基5L从进样口倒入15L发酵罐中，盖上盖子。检查发酵罐安装完好后，105℃灭菌15分钟。

③接种：可以采用火焰接种法，在接种口放置酒精圈，点燃后，将菌种通过火焰圈迅速倒入发酵罐内，进行计时培养。

④发酵：种子培养好后，将种子接到发酵罐中，接种量1%～5%，36℃-37℃控温通风培养，搅拌转速200转/分，0～1小时，通风比l∶0.5～0.8；35hr以后调速380转/分；24～28小时，通风1∶1.0。每6小时测定活力一次，外观糖一次；每2小时测pH一次，记录通风量，转速、温度等。发酵过程监测时，注意观察发酵罐的结构，测定结果记录于表，测定时同时镜检。定期测定菌液浓度，当菌淮浓度达到最高时结束发酵。

⑤取样：自培养操作开始起，每6小时取1次样。取样前后，要用蒸汽冲取样口。

5.注意事项

（1）试管接摇瓶前，摇瓶培养基要设肉汤平板划线空白对照，检查摇瓶种子培养基是否灭菌彻底。

（2）种子培养液接发酵罐之前，要对种子培养液镜检，检查是否有杂菌污染。

6.思考题

（1）发酵控制应注意哪些参数？这些参数对微生物发酵有什么影响？

（2）在摇瓶中影响通风量的因素有哪些?

（3）发酵时，通风搅拌是不是越强烈越好?

生物技术制药实验：枯草芽孢杆菌发酵培养

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