细菌增殖曲线测定结果

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验三十二细菌增殖曲线的测定1.实验目的通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物特征和规律，绘制生长曲线图2.实验原理大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20分钟分裂一次。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可使次级代谢产物积累更多？

实验三十二细菌增殖曲线的测定

1.实验目的

通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物特征和规律，绘制生长曲线图

2.实验原理

大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20分钟分裂一次。将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。测定细菌的生长曲线，了解其生长繁殖规律，这对人们根据不同的需要，有效地利用和控制细菌的生长具有重要意义。

3.实验材料与试剂

菌种：大肠杆菌，种子培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，发酵培养基（g/l）：葡萄糖2g，NaCl2g,NaHPO₄1.6g,（NH4）2SO₄1.6g,定容至1L,调pH至7.2。

4.实验仪器与器材

光电比色计、摇床、冰箱。

5.实验步骤

（1）将在种子培养基中培养20小时的培养液3000r/min离心10分钟，倾去上层液，加入无菌的生理盐水，制成每毫升细胞数为10⁹个均匀液。(www.chuimin.cn)

（2）取10个盛发酵培养液的三角瓶，各接3ml菌液作种子，在摇床上相同位置30℃振荡培养，并立即取下1瓶为0时的增殖状态。然后于培养1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时各取1瓶，每个间隔的菌液分别吸取5ml菌于无菌试管中，置4℃下保存。

（3）用没接种的培养液位空白对照，将上述菌液于波长600nm处比色。要求光密度值在0.3~0.6之间，若超过，用未接种培养液适当稀释。

（4）记录结果按以下格式，将测定的OD600值填入：

然后再以菌悬液OD值为纵坐标，培养时间为横坐标，绘出大肠杆菌培养的增殖曲线。

6.注意事项

测定不同时间点的菌液的OD600值，一定要严格按照时间点取菌液测定，测定时一定要保证菌液是均匀状态，如菌液有沉淀可先将菌液、轻轻摇匀后再行测定。