生物技术制药实验：玻璃器皿准备与灭菌技术

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验三十发酵实验用玻璃器皿的准备及灭菌技术1.实验目的学习发酵实验用玻璃器皿在灭菌前的包扎工作。电热干燥箱适用于玻璃器皿的灭菌，高压蒸汽灭菌锅适用于含水培养物和玻璃器皿的灭菌。

实验三十发酵实验用玻璃器皿的准备及灭菌技术

1.实验目的

（1）学习发酵实验用玻璃器皿在灭菌前的包扎工作。

（2）掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的原理和操作。

2.实验原理

为保持发酵实验用玻璃器皿灭菌后的无菌状态，需要对它们灭菌前进行包扎，前期准备工作看似简单，但如操作不慎或不按操作规程去做，则会影响实验结果，最终甚至会导致实验失败。

灭菌的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌目的。电热干燥箱适用于玻璃器皿的灭菌（培养皿、吸管等），高压蒸汽灭菌锅适用于含水培养物和玻璃器皿的灭菌。

3.实验仪器和材料

电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，5ml吸管30只，9cm培养皿10套，120mm×12mm试管120只，250ml三角瓶30个，脱脂棉250g，天然棉250g，8层纱布30块，线绳。

4.实验步骤

（1）洗涤

①新器皿应在2﹪盐酸浸泡数小时再洗涤。

②琼脂块不能倒入下水道。

③含菌培养基一般先煮再洗。

④洗涤后玻璃器皿上水应均匀湿润而无条纹和水珠。

（2）包扎

①平皿的包扎：10个一包。前9个方向一致，最后一个反放，用纸卷成卷，也可放在特制铁桶中灭菌。(www.chuimin.cn)

②吸管的包扎：在吸管尾部塞入少许脱脂棉，脱脂棉长约1cm，距管口约0.5cm，以防止在使用时造成污染。脱脂棉松紧适当，多余的棉花可用火焰烧掉。每支吸管用约6cm宽纸条，吸管头部包衬双层纸，以30℃～45℃卷起，吸管尾部用剩余纸条打成一结，防止散开，标上容量。使用时，从吸管中间凝断包扎纸带，抽出吸管。

③试管的包扎：用天然棉做成棉塞，紧贴管臂，松紧适宜，棉塞要实，2/3塞进管口。也可用硅胶塞。十只一把，外加牛皮纸，扎好。脱脂棉易吸水，可能造成染菌。

④三角摇瓶的包扎：用8层纱布（大小适宜），塞入瓶口2/3，瓶外部分揪成一团，再用一层牛皮纸或两层报纸把纱布遮严（以免打湿），包扎，用绳子系成活扣。使用时，去掉包扎纸，拿去纱布，接种后，将纱布塞进瓶口，纱布四角拉下，用绳子系成活扣。

（3）电热干燥箱灭菌操作步骤

①装箱将准备灭菌的玻璃器具洗涤干净、晾干，用纸包裹好，放入电热干燥箱内。关好箱门。

②灭菌接通电源，打开排气孔，温度升至80℃～100℃时关闭气孔，继续升温至160℃～170℃，恒温2小时。

③灭菌结束后，断开电源，自然降温至60℃，打开电热干燥箱门，取出物品放置备用。（4）高压蒸汽灭菌锅灭菌操作步骤

①加适量水，放入物品。物品间要有空隙，盖子对称拧紧。

②通电加热，将锅内空气排放干净，排放空气的方法有两种，a.开放气阀，待冒热蒸汽3～5分钟即可；b.压力升至0.05MPa时打开放气阀，使压力降为零。放完空气后，关闭放气阀，压力在0.105～0.13MPa之间时，计时约25分钟左右（含糖多、有生物活性物质的培养基，灭菌压力应小些，时间长些。）。

③锅内压力降为零后，方可开盖取物。

5.注意事项

（1）电热干燥箱灭菌时，器皿在烘箱内不宜装得太满、太紧，以免影响温度的均匀上升；灭菌物品不能直接放在烘箱底板上，防止包纸烘焦；灭菌温度恒定在160℃～170℃为宜，温度过高，纸和棉花会被烤焦。降温时，待温度自然降至60℃以下再打开箱门，取出物品，以免因温度过高而骤然降温，导致玻璃器皿和玻璃箱门炸裂。

（2）在使用高压蒸汽灭菌器进行灭菌时，蒸汽灭菌器内冷空气的排除是否完全极为重要。当水蒸气中含有空气时，压力表所表示的压力是水蒸气压力和空气压力的总和，不是水蒸气的实际压力，对应的温度不是灭菌器内的实际温度，实际温度偏低，这样将达不到灭菌所需的温度。因此，必须将灭菌器内的冷空气完全排除，才能达到完全火菌的目的。不能在压力尚未降到零时就打开锅盖或强行放气，否则易造成灭菌有效时间缩短和容器中的液体爆沸。

6.思考题

（1）实验中可能会出现什么问题？如何解决？

生物技术制药实验：玻璃器皿准备与灭菌技术

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