种子细胞筛选与规模化培养在生物制药实验中的应用

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验二十二种子细胞筛选与细胞规模化培养1.实验目的掌握单细胞分离和培养技术了解细胞规模化培养设备与进样接种技术2.实验原理采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。

实验二十二种子细胞筛选与细胞规模化培养

1.实验目的

（1）掌握单细胞分离和培养技术

（2）了解细胞规模化培养设备与进样接种技术

2.实验原理

采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。单细胞他离法的难度与细胞或个体的大小成反比，较大的微生物如藻类、原生动物较容易，个体较小的细菌则较难。在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作，挑取单孢子或单细胞进行培养。也可以采用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来，然后移到合适的培养基进行培养。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求，多限于高度专业化的科学研究中采用。

3.实验材料与试剂

经过多次继代的植物悬浮细胞、液体MS培养基、8%琼脂糖的固体培养基。

4.实验仪器与器材

超净工作台、高压灭菌锅、光照培养箱、低速离心机、倒置光学显微镜、灭菌培养皿。5.实验步骤

（1）种细胞的筛选（单细胞平板培养法）

①将琼脂糖培养基在加热器上融化，将悬浮细胞过滤除去大的细胞团，然后离心，并将细胞密度调整至5×10⁵个/ml左右。

②将融化的琼脂培养基在未凝固前与上述细胞悬浮液按4∶1混合后，平铺在培养皿中，操作时特别注意温度不能过高，以免给细胞造成伤害。

③在细胞分裂形成可见的小愈伤组织时，将单个的愈伤组织分别接种在平板培养基上单独培养，由每个细胞形成的愈伤组织即为一个细胞系（clone）。

实际应用时，待单个愈伤组织长至能检测成分的大小时，取每个愈伤组织的一半用于成分分析，另一半继续培养。成分分析完成后，淘汰不符合要求的愈伤组织，对复合要求的愈组织扩大繁殖。繁殖到一定规模后即可用于规模化生产。

（2）细胞规模化培养

将各自的悬浮细胞收集在一起，按照生物反应器的进样操作接种，接种后每隔3天取样测定培养情况，2周后结束实验，根据测定结果绘制细胞生长曲线图。(www.chuimin.cn)

6.注意事项