植物愈伤组织诱导和增殖实验-生物技术制药实验

2023-12-07 百科知识版权反馈

【摘要】：实验十九植物愈伤组织诱导和增殖1.实验目的学习诱导植物外植体形成愈伤组织的方法。因此我们可通过改变激素种类和浓度，来有效调节植物组织培养的愈伤组织形成及器官分化。

实验十九植物愈伤组织诱导和增殖

1.实验目的

学习诱导植物外植体形成愈伤组织的方法。

2.实验原理

根据Skoog和Miller提出的生长素和细胞分裂素相对浓度调节器官分化的理论，相对高的生长素浓度有利于细胞增殖和不定根的分化，而相对高的细胞分裂素浓度则有利于不定芽的分化。因此我们可通过改变激素种类和浓度，来有效调节植物组织培养的愈伤组织形成及器官分化。

3.实验仪器、材料和试剂

（1）仪器超净工作台、光照培养箱

（2）材料烟草（水稻）幼苗、MS固体培养基、70%酒精、0.1%HgCl₂、无菌重蒸水、培养皿、无菌镊子、无菌手术刀片、刀柄、无菌烧杯.

4.实验步骤

（1）取自烟草完全展开的幼叶，用自来水洗净晾干。(www.chuimin.cn)

（2）在超净工作台上将叶片浸于装有70%酒精的无菌玻璃烧杯中30秒，然后移入0.1% HgCl₂溶液中3～5分钟。无菌水至少洗涤3次，每次3～5分钟。

（3）将灭菌后的叶片置于无菌培养皿内，用解剖刀将无菌叶片切成5mm×5mm大小碎片。

（4）将适宜大小的外植体接种到培养基上，每个三角瓶接入4～5块外植体。

（5）将三角瓶置于生长箱或培养室内的培养架上。培养条件为：温度25℃～27℃，光周期为光∶暗=16∶8，光强约1500Lux左右。

5.注意事项

（1）消毒以后的所有操作过程，都应在超净工作台内进行，操作所用的镊子、解剖刀和剪刀使用前要插入95%乙醇溶液中，使用时在酒精灯火焰上炽烧片刻，待冷却后再使用。

（2）外植体切割时，动作要快，防止失水而影响生长。

6.思考题

（1）分析影响愈伤组织诱导和分化的主要原因。