离子交换色谱实验展示十七核苷酸成果

2025-09-30 百科知识版权反馈

【摘要】：实验十七核苷酸的离子交换色谱1.实验目的学习离子交换色谱的基本操作方法。

实验十七核苷酸的离子交换色谱

1.实验目的

（1）学习离子交换色谱的基本操作方法。

（2）掌握利用离子交换树法分离核苷酸的方法和核苷酸的测定方法。

2.实验原理

RNA水解可生成各种核苷酸，核苷酸含有一些可解离基团，如磷酸基、碱基、羟基等，在一定条件下，可用阳离子交换树脂或阴离子交换树脂进行分离。本实验采用强碱性阴离子交换树脂将各种核苷酸分离，通过测定收集液在不同波长的光密度比值（OD250/OD260，D280/OD260，OD290/OD260）,与标准值对照，确定为何种核苷酸。根据收集的体积和光密度值（OD260）以及各种核苷酸的摩尔消光系数，可计算各核苷酸的含量。各种核苷酸的标准比值与摩尔分子吸光吸数见下表

3.实验材料与试剂

酵母RNA，强碱性阴离子交换树脂（100~200目，型号201×8），1mol/L甲醛溶液取21.4ml 88%甲酸，加蒸馏水定容至500ml，1mol/L甲酸钠溶液称取34.15g甲酸钠用蒸馏水溶解，定容至500ml，0.02mol/L甲酸溶液取10ml1mol/L甲酸溶液，稀释定容至500ml，0.15mol/L甲酸溶液取75ml1mol/L甲酸溶液定容至500ml，0.01mol/L甲酸-0.05mol/L甲酸钠溶液（pH4.44）取取5ml1mol/L甲酸溶液和取25ml1mol/L甲酸钠溶液混合，用水定容至500ml，0.1mol/L甲酸或0.1mol/L甲酸钠溶液（pH3.47）取5ml1mol/L甲酸溶液和取50ml1mol/L甲酸钠溶液混合，用水定容至500ml，0.3mol/L氢氧化钾溶液取1.68g氢氧化钾，用水溶解，定容至100ml，2mol/L过氯酸溶液取17mol/L70%~72%过氯酸，加水定容至100ml，1mol/L盐酸，0.5mol/L氢氧化钠溶液。

表1-13　某些核苷酸的物理常数(https://www.chuimin.cn)

4.实验仪器与器材

玻璃柱、部分收集器、紫外分光光度计、恒温水浴槽、离心机。

5.实验步骤

（1）RNA水解取20mg酵母RNA，溶于2ml0.3mol/L氢氧化钾溶液中，于37°C水解20小时，生成核苷酸。水解完成后，用2mol/L过氯酸溶液调至pH2以下，用4000r/min离心10分钟，取上清液，用2mol/LNaOH溶液调至pH8。

（2）树脂的预处理取强碱性阴离子交换树脂201×8，用水浸泡，倾去水颗粒，滤干。用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡1小时，用去离子水洗至中性。再用1mol/L盐酸浸泡0.5小时，用去离子水洗至中性。用1mol/L甲醛溶液浸泡，使树脂转为甲酸型。

（3）装柱取内径1~1.2cm、高20cm左右的玻璃柱，下端接好出口，株底部盖上尼龙网或玻璃纤维，防止树脂流出。将上述处理好的树脂悬浮液一次倒入柱内，用1mol/L甲酸钠溶液洗至无氯离子（用1%AgNO₃检查）。再用去离子水洗至中性。然后在树脂表面盖一片滤纸，

离子交换色谱实验展示十七核苷酸成果

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